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煙草CSN4基因的原核表達(dá)及純化
關(guān)鍵詞：cop9信號(hào)復(fù)合體 基因克隆 原核表達(dá) 親和純化
摘要：以野生型煙草（Nicotiana tabacum）為試驗(yàn)材料,采用RT-PCR克隆獲得CSN復(fù)合體亞基CSN4c DNA序列,基因登錄號(hào)為KC866360。序列分析表明,CSN4基因ORF長(zhǎng)為1194 bp,編碼398個(gè)氨基酸,蛋白分子質(zhì)量為43.78 k Da。將CSN4構(gòu)建至原核表達(dá)載體,獲得重組子pET28a-CSN4/BL21（DE3）,通過Ni-IDA親和層析純化目的蛋白,SDS-PAGE和Western Blotting檢測(cè),結(jié)果顯示：0.25 mM IPTG,15℃誘導(dǎo)16 h獲得濃度為0.476 mg/m L、純度高達(dá)95%的CSN蛋白,為后續(xù)CSN4基因功能研究奠定了基礎(chǔ)。
貴州大學(xué)學(xué)報(bào)·藝術(shù)版雜志要求:
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