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河川沙塘鱧GHR和IGF-2基因克隆及mRNA的時序表達
關鍵詞：河川沙塘鱧 ghr 基因克隆 mrna表達量
摘要：生長激素/胰島素樣生長因子-軸(growth hormone/insulin-like growth-axis,GH/IGF-軸)是調控魚類生長的主要內分泌軸線。為探討生長相關基因GHR、IGF-2對河川沙塘鱧(Odontobutis potamophila)生長發育的調控機制,采用cDNA末端快速擴增(RACE)和實時熒光定量PCR等技術,對河川沙塘鱧的GHR、IGF-2基因進行了克隆和表達模式分析。研究結果顯示:河川沙塘鱧GHR基因的cDNA全長序列為2 179 bp,開放閱讀框為1 830 bp,共編碼609個氨基酸,IGF-2基因的cDNA全長序列為1 586 bp,開放閱讀框642 bp,共編碼213個氨基酸。采用qRT-PCR方法檢測了GHR、IGF-2基因在9個不同組織(腦、肝、心、肌肉、脾、腸、性腺、鰓、腎)和8個胚胎不同發育時期(受精卵期、桑椹胚期、原腸胚期、神經胚期、體節期、口裂期、出膜后1 d、出膜后3 d)的表達情況。結果表明:IGF-2和GHR基因在所檢測的9種組織中均有表達,其中以肝臟、肌肉、性腺、腦中的表達量較高,在胚胎發育階段GHR和IGF-2基因表達呈先上升后下降的趨勢,在原腸胚期表達量較高,表明其在胚胎發育過程中發揮重要作用。qRT-PCR進一步比較了雌、雄河川沙塘鱧GHR和IGF-2基因在不同生長發育階段(90、150、210、270、330 d)腦、肝、肌肉mRNA的表達量,結果表明:各時期雄魚GHR和IGF-2基因在肝組織中表達量均顯著高于雌魚,肌肉和腦GHR基因mRNA的表達量則無顯著差異。而IGF-2基因則僅在雌、雄魚210 d的腦和150、210 d的肌肉存在顯著性差異,推測肝GHR和IGF-2基因mRNA表達的雌雄差異是河川沙塘鱧雌雄生長差異的主要原因之一。
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