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固定化胰蛋白酶整體小柱的制備及其用于微量蛋白質的快速酶解
關鍵詞：制備 整體柱 蛋白質組學 固定化酶 胰蛋白酶
摘要：發展了一種光引發聚合法制備固定化胰蛋白酶整體小柱的方法,以用于微量蛋白質的快速酶解。整體小柱由功能單體4-戊烯酸琥珀酰亞胺酯、甲基丙烯酸羥乙酯,交聯劑季戊四醇三丙烯酸酯和三元致孔劑二甲基亞砜、N,N-二甲基甲酰胺、十二醇在20μL的移液器吸頭尖端原位聚合而成。形成整體柱后,胰蛋白酶分子通過氨基與琥珀酰亞胺酯反應實現固定化。系統研究了聚合溶液中活性酯含量與柱床體積對胰蛋白酶固載量的影響,評價了固定化酶整體小柱對標準蛋白細胞色素C和牛血清白蛋白的酶解效率,以及整體小柱的穩定性和重復性。結果表明,在離心輔助下,酶解過程可在10 min內完成,批次間具有良好的重復性。最后將固定化酶整體小柱應用于1×10^5個人急性早幼粒白血病(NB4)細胞與人急性T細胞白血病(Jurkat T)細胞的快速酶解,經納升級液相色譜與高分辨質譜聯用分析后鑒定得到2 489個和2 572個蛋白質。相比于溶液狀態下的酶解,分別提高了2.2%和6.1%的蛋白鑒定數量,展現了其在蛋白組學研究中的應用潛力。
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