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銀鯽Greb1的克隆、表達及功能研究
關鍵詞：銀鯽 greb1 垂體發育 激素
摘要：為研究銀鯽(Carassius gibelio)雌激素應答基因(Growth regulation by estrogen in breast cancer cell 1,Greb1)的表達特征和功能,采用RACE方法克隆了銀鯽Greb1的全長cDNA(CgGreb1)。CgGreb1的cDNA全長為954 bp,其中包含一個765 bp的開放閱讀框,編碼255個氨基酸。大多數脊椎動物有多個Greb1的變體,長度為386—1988個氨基酸,其中CgGreb1是最短的一個。序列比對結果表明脊椎動物Greb1蛋白的N端區域極為保守,且CgGreb1位于Greb1蛋白的N端區域,該區域與其他脊椎動物Greb1的同源性超過60%。qRT-PCR結果顯示,在成體組織中,CgGreb1主要在垂體、腦、性腺和肝臟中表達,其中在垂體中CgGreb1的表達最高;在注射促黃體生成素釋放激素類似物和人絨毛膜促性腺激素后的雌魚垂體中,CgGreb1的表達逐漸上升隨后降低,并在產卵時維持較高的表達;在胚胎發育過程中,CgGreb1從50%外包開始表達,其表達量隨胚胎發育而升高,在受精后24h達到峰值,隨后表達量下降,在受精后48h不表達。原位雜交結果表明,在原腸期,CgGreb1信號位于胚層的邊緣;在體節期,CgGreb1信號逐漸增強并出現在神經系統;在受精后24h,CgGreb1信號在腦和脊髓等中樞神經系統增強;從受精后30h開始,CgGreb1信號減弱;在受精后48h,檢測不到CgGreb1信號。在注射CgGreb1 MO的銀鯽胚胎中,tshβ、prl和gthα分別標記的3種垂體細胞減少,證明CgGreb1參與早期銀鯽垂體細胞的發育。研究結果為進一步揭示銀鯽垂體發育和生長調控機制奠定了基礎。
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