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miR-490-3p通過靶向調(diào)控TGFBR1抑制非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的增殖和侵襲
關(guān)鍵詞：肺癌 tgfbr1 增殖 侵襲 遷移
摘要：目的:以非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞為模型,探討miR-490-3p在肺癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用及其調(diào)控機(jī)制。方法:通過miRBase數(shù)據(jù)庫獲得miR-490-3p序列,設(shè)計(jì)miR-490-3pmimics并轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞,CCK8、細(xì)胞劃痕及Transwell實(shí)驗(yàn)分別檢測miR-490-3p過表達(dá)對A549細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力的影響;使用miRwalk在線工具預(yù)測miR-490-3p可能的調(diào)控基因,通過實(shí)時熒光定量PCR及Western印跡對候選調(diào)控基因進(jìn)行篩選,最后通過雙螢光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證miR-490-3p與調(diào)控基因之間的靶向關(guān)系。結(jié)果:過表達(dá)miR-490-3p可顯著抑制A549細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移能力;在預(yù)測的miR-490-3p候選靶基因中,選擇與細(xì)胞增殖、遷移等表型相關(guān)的RASAL2、TGFBR1、PAPPA、HMGA2、TGFA靶基因進(jìn)行實(shí)時熒光定量PCR及Western印跡篩選,結(jié)果僅TGFBR1基因在mRNA和蛋白水平的表達(dá)與miR-490-3p水平呈負(fù)相關(guān),且雙螢光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)證實(shí)miR-490-3p可直接與TGFBR1的3'-UTR結(jié)合并抑制其表達(dá)。結(jié)論:miR-490-3p通過靶向調(diào)控TGFBR1的表達(dá)抑制非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞的增殖和侵襲。
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