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基于生物毒效檢測的附子不同炮制品質量評價研究
關鍵詞：附子 心毒性 強心 質量標志物 生物評價
摘要：附子炮制品種類繁多,毒效差異不明確,亟需建立精準的質量評控方法,保障臨床用藥安全有效。采用引起大鼠室性早搏(premature ventricular contraction,PVC)的最小量測定法評價8種附子炮制品的生物毒性,結果發現生附片醇提液的最小中毒劑量(minimal toxic dose,MTD)為0.16 g·kg^-1,毒性遠強于其余附片;其次為黑順片、白附片、刨附片、炮附子與蒸附片,醇提液的MTD為2.64~5.75 g·kg^-1;炒附片與炮天雄未檢測出心毒性,安全性好。建立急性心衰大鼠+dp/dtmax測定法評價8種附子炮制品的強心活性,并通過成分-活性相關分析篩選、驗證強心質量標志物。結果顯示,8種附片均具有明確的強心效果,其中,生附片強心效果最強,給藥15 min后大鼠心功能恢復正常;黑順片、白附片等5種附片具有中等強度強心活性;而炮附子與炮天雄強心活性最弱。采用LC-MS/MS法同時測定附子水煎液中13種生物堿的含量,結果發現烏頭堿、新烏頭堿與次烏頭堿3種劇毒成分無法檢測,去甲烏藥堿僅在生附片中存在,去甲豬毛菜堿在生附片中的含量高出其余附片4~56倍。相關性分析表明,去甲豬毛菜堿與強心指標的相關性最好,相關性系數高達0.817,而3種單酯型生物堿與強心作用相關性不大。進一步直接對13種單體的強心活性驗證評估,表明去甲烏藥堿與去甲豬毛菜堿是強心活性物質,其余11種成分無強心活性。該研究建立了附子生物毒效精準評價的技術方法,揭示了8種常見炮制品毒效作用的強弱規律,發現了強心質量標志物,為附子炮制品的質量評控及臨床合理選用提供了科學支撐。
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