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利用BAC/galK系統(tǒng)構(gòu)建缺失潛伏相關(guān)轉(zhuǎn)錄物啟動(dòng)子LAP1的偽狂犬病突變病毒
關(guān)鍵詞：偽狂犬病病毒 潛伏感染 細(xì)菌人工染色體克隆 半乳糖激酶 lap1
摘要：偽狂犬病病毒感染豬后,在耐過豬中均能形成潛伏感染。在潛伏感染期間,病毒基因組僅大量轉(zhuǎn)錄病毒潛伏相關(guān)轉(zhuǎn)錄物(latency-associated transcripts,LATs)。為了研究潛伏相關(guān)轉(zhuǎn)錄物啟動(dòng)子對(duì)LAT表達(dá)特征的影響,通過構(gòu)建缺失LAT啟動(dòng)子LAP1、并添加絕緣子cHS4的供體質(zhì)粒,利用感染性細(xì)菌人工染色體克隆(bacterial artificial chromosome,BAC)操作平臺(tái)和galK(半乳糖激酶)正負(fù)篩選系統(tǒng),獲得BAC載體pBAC-JS-cHS4-△LAP1b,BAC載體與質(zhì)粒pcDNA3.1-cre共轉(zhuǎn)染Vero細(xì)胞后獲得突變病毒vJS-cHS4-△LAP1b。空斑和生長曲線結(jié)果顯示,vJS-cHS4-△LAP1b與親本病毒具有相似的生物學(xué)特性。vJS-cHS4-△LAP1b感染Vero細(xì)胞后,RT-PCR檢測顯示表達(dá)大的潛伏相關(guān)轉(zhuǎn)錄本(large latency transcripts,LLT)。vJS-cHS4-△LAP1b的構(gòu)建為深入研究LAT表達(dá)特征及功能提供了依據(jù)和基礎(chǔ)。
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