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miR-124和Otx2在牙鲆變態發育期間的表達調控及其靶向關系驗證
關鍵詞：牙鲆 甲狀腺激素 otx2
摘要：牙鲆(Paralichthys olivaceus)是研究魚類變態發育的理想模型,其右眼移位及生活習性的改變受甲狀腺激素(TH)調控。同時microRNA (miRNAs)在變態期間發揮關鍵性作用。為研究TH、pol-miR-124及Otx2在牙鲆變態中的調控機制,本實驗通過生物信息學方法預測pol-miR-124潛在靶基因Otx2,首先利用qRT-PCR檢測在牙鲆各組織、正常變態及外源TH處理仔魚后pol-miR-124和Otx2的表達模式。然后克隆400 bp含有“種子序列”的Otx2 3′UTR區序列,構建野生型重組載體pmirGLO-Otx2并轉染293T細胞檢測雙熒光素酶活性確定靶向關系。qRT-PCR結果表明: pol-miR-124和Otx2均在腦和眼睛組織中特異性高表達;在仔魚變態28 dph表達量最高與變態進程相一致;TH作用下,在20 dph、24 dph時期, pol-miR-124的表達量低于正常組,而Otx2的表達量高于正常組;在28 dph、32 dph、36 dph時期, pol-miR-124的表達量高于正常組,但Otx2的表達量低于正常組,兩者呈現出相反的表達趨勢;雙熒光素酶結果顯示pol-miR-124靶向負調控Otx2。本實驗旨為揭示牙鲆視覺感光系統的發育機制奠定研究基礎,同時為探討牙鲆變態發育機制提供了新的理論依據。
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