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豬細小病毒7型SYBR Green Ⅰ熒光定量PCR檢測方法的建立及臨床樣品的檢測
趙冠宇; 解長占; 孫文超; 張赫; 那少龍; 李卓昕; 張涵; 李成輝; 哈卓; 李金鳳; 韓繼成; 南福龍; 莊忻雨; 張英; 金寧一 吉林大學動物醫學學院; 吉林長春130062; 軍事科學院軍事醫學研究院軍事獸醫研究所; 吉林長春130122; 溫州大學病毒學研究所; 浙江溫州325035; 延邊大學農學院; 吉林延吉133000; 吉林大學動物科學學院; 吉林長春130062
關鍵詞：豬細小病毒7型 實時熒光定量pcr 衣殼蛋白基因
摘要：采用PCR方法擴增豬細小病毒7型(PPV7)衣殼蛋白基因保守區域493 bp,將其克隆到pMD18-T載體,構建重組質粒作為標準陽性質粒,以其為模板建立用于檢測PPV7的SYBR GreenⅠ實時PCR檢測方法,并驗證其靈敏性、特異性和重復性。結果表明,本試驗建立的SYBR GreenⅠ熒光定量PCR檢測方法在2.85×10^1~2.85×10^8拷貝/μL呈良好的線性關系,相關系數為0.995,斜率為4.158,靈敏度可達到2.85×10^1拷貝/μL。該方法對于豬繁殖障礙性傳染病常見病原如PRRSV、PCV2和PRV未出現特異性擴增,表明特異性好。所有標準曲線在溶解溫度為83.103℃時出現單一的特異峰。使用本方法檢測了2017年山東地區7家養豬場216份臨床樣品,總陽性率為12.5%。
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