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多重熒光定量PCR測定登革熱Ⅰ~Ⅳ型方法的建立與初步評價
關鍵詞：登革熱 熒光定量pcr 血清型 病毒載量
摘要：目的探討多重熒光定量PCR測定登革熱Ⅰ~Ⅳ型方法的建立與初步評價。方法針對登革熱Ⅰ~Ⅳ型使用自建的引物探針對反應條件及溫度進行調整,且對陽性樣本進行不同濃度的稀釋,檢測自建多重熒光定量PCR在登革熱Ⅰ~Ⅳ型測定中的重復性、靈敏性及特異性。結果6份登革熱陽性樣本通過自建的檢測方法來進行檢測,全部能夠顯示明顯的S曲線擴增,且與原有確證方法相比,不同型別的結果一致。其他10份病毒陽性樣本及陰性樣本全部沒有顯示擴增曲線,提示自建的檢測方法特異性良好。分別檢測登革熱Ⅰ~Ⅳ型,變異系數(CV%)值水平范圍:0.51~5.51,提示重復性較好。使用自建的多重熒光定量PCR對登革熱不同型別進行檢測的平均用時與ELISA法相比無顯著差異(t=1.561,P>0.05)。通過自建的多重熒光定量PCR測定通過儀器來完成核酸的自動提取,在儀器當中加樣、上機之后不需要另外的操作,充分降低了發生污染的風險。結論本次研究設計建立的登革熱Ⅰ~Ⅳ型多重熒光定量PCR檢測方法,在重復性、靈敏性及特異性方面均較為理想;且相比ELISA法在加樣后無需另外手動操作,更加簡易方便。
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