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魚源魯氏耶爾森菌mobBC基因無痕缺失株的構建及其毒性研究
關鍵詞：魯氏耶爾森菌 mobbc基因 無痕缺失 體內感染 毒性
摘要：為探究魯氏耶爾森菌(Yersinia ruckeri)的四型分泌系統(T4SS)中mobBC基因的作用,本研究構建了強毒力Y.ruckeri SC09菌株mobBC基因的無痕缺失株并研究了其生理變化和毒性影響。將mobBC基因上、下游同源臂克隆入自殺載體pLP12并轉化供體菌β2163,得到pLP12-mobBC/β2163,進一步通過接合轉移,將pLP12-mobBC導入受體菌株SC09中。利用抗性篩選和vmi480反向篩選獲得無痕缺失株Y.ruckeriΔmobBC,并進行PCR測序鑒定。同時構建回補株Y.ruckeriΔmobBC+p Mob BC。通過電子顯微鏡觀察缺失株形態變化,同時繪制野生型菌株、缺失株和回補株的生長曲線;將缺失株和野生型菌株感染模式小鼠,初步研究mobBC毒性;將野生型菌株、缺失株和回補株感染虹鱒魚,進一步研究其對水生動物的體內毒性;對虹鱒魚主要感染組織進行細菌計數并分析菌株在感染組織的分布差異;觀察感染缺失株和野生型菌株的虹鱒魚組織病理學和免疫組織化學差異,進一步分析毒性影響。結果顯示,本實驗構建了無痕缺失株Y.ruckeriΔmobBC,并回補了mobBC基因。缺失株與野生株超微結構對比變化不顯著,但缺失株的生長性能弱于野生株和回補株,且表現出較弱的體內毒性和較輕的組織感染力。這提示mobBC基因可能是Y.ruckeri重要的毒力基因,該基因的缺失能夠有效降低Y.ruckeri的增殖力和對宿主的感染力。本文首次研究了水產病原菌Y.ruckeri SC09的mobBC基因的毒性作用,為該病原菌的毒力研究增加了新的基礎。
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