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Ad-LIF-OSM雙基因轉染飼養細胞對臍血造血細胞體外增殖和分化的影響
關鍵詞：腺病毒 白血病抑制因子 抑瘤素m 共表達載體
摘要：目的構建表達人白血病抑制因子（LIF）和抑瘤素M（OSM）雙基因的WI-38人胚肺成纖維細胞，并以此細胞作為飼養層細胞觀察其對CD34造血干／祖細胞體外增殖和分化的影響。方法以雙啟動子轉移載體pAdTrack-CMV-LIF-polyA＋promoter。為基礎，將OSM基因片段酶切后插入，構建出轉移質粒pAdTrack-CMV-LIF-polyA＋promoter。OSM。將構建正確的轉移質粒與腺病毒骨架質粒共轉化，獲得重組腺病毒載體pAdEasy-1-pAdTrack-CMV-LIF-polyA＋promoter。OSM，通過包裝，收獲重組腺病毒（Ad-LIF-OSM）。將重組腺病毒感染飼養層細胞，經RT．PCR、ELISA法檢測外源基因在細胞中的表達；體外與CD34造血干／祖細胞共培養后，通過Transwell法和細胞計數檢測，比較各實驗組干／祖細胞體外擴增與分化情況。結果測序結果顯示重組載體中的LIF和OSM基因序列正確；轉基因飼養層細胞中能檢測到外源LIF和OSM基因的轉錄和表達；外源LIF和OSM基因在造血干／祖細胞體外培養中能夠發揮作用。結論成功構建攜帶人LIF和OSM的雙基因重組腺病毒載體（Ad-LIF-OSM），Ad-LIF．OSM在造血干／祖細胞體外培養的過程中能夠有效地擴增CD34造血干／祖細胞，并延緩其分化。
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