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FTY720誘導(dǎo)多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞株U266自噬與凋亡的研究
關(guān)鍵詞：免疫抑制劑 fty720 多發(fā)性骨髓瘤 細(xì)胞凋亡 自吞噬作用
摘要：目的探討新型免疫抑制劑FTY720對(duì)多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞株U266細(xì)胞凋亡及自噬的影響，并探討相關(guān)的作用機(jī)制。方法0、2．5、5．0、10．0及20．0μmol／LFTY720處理U266細(xì)胞24h后，應(yīng)用CCK_8方法檢測(cè)不同濃度FTY720對(duì)U266細(xì)胞生存率的影響；20．0μmol／LFTY720分別處理細(xì)胞0、2、6及24h，通過(guò)CCK-8方法檢測(cè)FTY720作用不同時(shí)間對(duì)U266細(xì)胞生存率的影響。同時(shí)應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)AnnexinV—FITC／PI染色檢測(cè)相應(yīng)的細(xì)胞凋亡率。不同濃度FTY720處理U266細(xì)胞后，應(yīng)用Western blot法檢測(cè)微管相關(guān)蛋白輕鏈3（LC3）B的表達(dá)，明確應(yīng)用FTY720后是否引起細(xì)胞發(fā)生自噬。FTY720單用或聯(lián)合應(yīng)用自噬抑制劑Bafilomycin A1處理U266細(xì)胞24h，檢測(cè)細(xì)胞生存率及凋亡率，并檢測(cè)其對(duì)抗凋亡因子survivin表達(dá)的影響。結(jié)果應(yīng)用FTY720后，U266細(xì)胞生存明顯受抑制，可引起細(xì)胞發(fā)生凋亡，作用呈濃度及時(shí)間依賴性。LC3B-Ⅱ表達(dá)明顯增加，呈濃度依賴性，表明FTY720可引起細(xì)胞發(fā)生自噬。應(yīng)用自噬抑制劑Bafilomycin A1后，可解救FTY720引起的細(xì)胞生存抑制及凋亡，同時(shí)可解救FTY720引起的survivin表達(dá)下降。結(jié)論FTY720可引起U266細(xì)胞發(fā)生凋亡及自噬，自噬對(duì)凋亡具有促進(jìn)作用。其機(jī)制可能為通過(guò)自噬在溶酶體降解了survivin等抗凋亡因子或其上游調(diào)控因子，從而促進(jìn)細(xì)胞凋亡。
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